Técnica de PCR para detecção de fungos

1 Materiais utilizados

a)     Pipetador automático;

b)     Ponteiras;

c)     Água Milli-q;

d)     Tampão buffer 10x;

e)     dNTP;

f)       Primers;

g)     Taq DNA Polimerase.

1.2 Equipamentos e utensílios

a)     Termociclador PCR;

2     METODOLOGIA

2.1  Inicialmente é feito o MIX para 10 reação dos primers TW81 e AB28, que contém:

Reação para os primers TW81 e AB28	10 reações
dH20	170µl
Tampão (buffer 10x)	25 µl
dNTP (1mM)	7,5 µl
Primer 1 (10mM)	10 µl
Primer 2 (10mM)	10 µl
Taq DNA Polimerase	2,5 µl
Mix/Poço	22,5 µl

2.2   Foram aliquotados:

22,5 µl de mix

05 µl de DNA

2.3    São 31 ciclos de amplificações do PCR , no programa: ITS-F- -  em que consistiu:

Etapa	Temperatura	Tempo
1	94°C	5 min
2	94°C	1 min
3	55°C	1 min 30 s
4	72°C	2 min
5	29 x
6	72°C	5 min
7	10°C
8	End