INTRODUÇÃO
A ocorrência de infecções alimentares ocasionadas por microorganismos
é um problema mundial de saúde pública. Alguns dos microorganismos mais
frequentes, relatados nas doenças transmitidas por alimentos (DTA), são a E. coli
e a Salmonella entre outros como C.botulinum.
E. coli é uma bacteria bacilo gram-negativa, aeróbia e
anaeróbia facultativa pertencente a família Enterobacteriacea, causadora
de infecções intestinais e extra-intestinais
Salmonella também pertencentes a família Enterobacteriaceae,
gram-negativas, em forma de bacilo, na sua maioria móveis, não esporulado,
não capsulado, sendo que a maioria não fermenta a lactose. São um gênero
extremamente heterogêneo, composto por três espécies, Salmonella
subterranea, Salmonella bongori e Salmonella
enterica.
O Clostridium botulinum é
um bacilo gram positivo, que se desenvolve em meio anaeróbio, produtor de
esporos, encontrado com freqüência no solo, em legumes, verduras, frutas,
sedimentos aquáticos e fezes humanas. A germinação dos esporos nos alimentos é
promovida por condições anaeróbicas (alimentos embalados ou lacrados) em que o
pH é superior a 4,5, com uma elevada atividade de água. Assim, as células
vegetativas produzem a toxina dentro do recipiente durante o armazenamento.
Existem diversas técnicas de detecção de microorganismos, dentre essas
destacam-se PCR (cadeia de polimerase reativa),ELISA (ensaio imunoenzimático) e
o PCR-ELISA (ensaio imunoenzimático ligado a cadeia de polimerase reativa).
ELISA
É um método imunoenzimático de grande
sensibilidade.O agente bacteriano se presente na amostra se liga ao anticorpo
específico, podendo este ser marcado por uma enzima fluorescente. Técnicas que
usam reações imunes podem ser associadas a outros métodos para melhorar a
detecção dos patógenos. Estes ensaios disponíveis comercialmente na forma
de kits específicos
para cada microorganismo.
PCR
É uma técnica de amplificação in vitro, que pode em questão de
horas, amplificar sequências especiíficas de DNA intacto ou fragmentado. Baseia-se
em um ciclo repetitivo de três reações, desnaturação, hibridização e extensão
do DNA, que ocorrem em diferentes temperaturas.em um mesmo tubo e na presença
de reagentes termo estáveis. Os reagentes são dois pequenos oligonucleotídeos
iniciadores,denominado primers, sintetizados para serem complementares as
sequencias conhecidas do DNA-alvo.
PCR-ELISA
O que é ?
A tecnologia de ensaio imunoenzimático ligado a cadeia de polimerase reativa
(PCR-ELISA), foi criada a partir da utilização da alta sensibilidade do PCR, das
sondas de ácido nucleico de especificidade, e do leitor de microplacas de
objectividade. Desde o seu estabelecimento, tem recebido uma grande atenção.
Os produtos de PCR são rotulados (por exemplo, digoxigenina) durante a
amplificação. Uma sonda de captura específica para o fragmento amplificado de
PCR é usado para imobilizar o fragmento amplificado para a microplaca. ELISA
age contra a rotulação (por exemplo, anti-digoxigenina) é então usado para
quantificar os produtos de PCR.
Qual
a vantagem?
PCR-ELISA têm sido utilizado desde os anos 1980 e se
transformou em um ensaio para a detecção de seqüências específicas dentro de
produtos de reação em cadeia da polimerase. Embora
muitos métodos estão disponíveis para a detecção de seqüências específicas, PCR-ELISA
são úteis para detectar e diferenciar entre alvos múltiplos. O PCR-ELISA também é útil para o
rastreio de amostras múltiplas.
Um dos aspectos mais úteis do PCR-ELISA é a diferenciação
entre os produtos de reacção em cadeia da polimerase gerados a partir de um conjunto
comum de primers que contêm variações
de sequências. Como as placas de
ensaio são relativamente baratas para se preparar, a captação de sondas pode
ser adicionadas, excluídas e facilmente modificadas.
OBJETIVO
O objetivo desse blog se aplica para pesquisadores e estudantes, em
busca de esclarecer duvidas ou buscar conhecimento sobre a técnica de PCR-Elisa.
Neste blog, introduzimos uma descrição básica da tecnologia e a sua aplicação
na área biomédica nos últimos anos.
REFERÊNCIAS
BIBLIOGRÁFICAS
